液相色譜法在中藥分析中的應用

真偽鑒別

        對于中藥的鑒別目前使用的方法較多，每種方法都有其特點(diǎn)和操作方法，鑒別方法也有針對的中藥和范圍，在操作起來(lái)會(huì )顯得過(guò)程繁瑣。中藥指紋圖譜可以全面的反應中藥中化學(xué)成分和特征。而到中藥的真偽未知時(shí)可以通過(guò)中藥指紋圖譜進(jìn)行鑒別和區分。

非法染色

非法染色是近年來(lái)曝光較多的中藥摻偽行為，染色中藥以次充好，不僅影響了中藥臨床療效，而且對患者健康帶來(lái)潛在危害。色素可分為天然色素和人工合成色素，部分合成色素具有致敏性和癌誘變性。因此中藥染色已嚴重影響中藥安全，需要加強監管和執法。

目前國家頒布的一系列藥品檢驗補充檢驗方法主要針對10 余種單味藥材采用薄層色譜法( TLC) 和高效液相法( HPLC) 檢測1 ～ 5種色素。繼國家相關(guān)檢驗標準公布后，中藥染色出現了新的變化，具有規避標準規定色素品種、多種色素配色染色等趨勢。

越來(lái)越多的研究者采用薄層、高效液相色譜、液相三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜、UHPLC-QTOF 建立了中藥中多達數十種常見(jiàn)染色色素系列定性、定量檢測方法，依色素性質(zhì)，分別采用溶劑提取、固相萃取等前處理方法，采用UPLC-QTOF等方法 進(jìn)行測定。建立的方法覆蓋色素品種多，適用于多種中藥品種，具備高通量、準確等特點(diǎn)，為中藥染色檢測提供了急需的參考方法。

非法添加

糖皮質(zhì)激素是由腎上腺皮質(zhì)最中層束狀帶分泌的一種代謝調節激素，具有調節糖、脂肪和蛋白質(zhì)的生物合成和代謝的作用，臨床上應用于內分泌代謝病、感染性疾病、血液病、心血管疾病、風(fēng)濕免疫病、呼吸疾病等的治療。但不適當的使用可導致多種不良反應，引起代謝紊亂。一些中藥制劑中非法添加糖皮質(zhì)激素，使患者短期內病情得到改善，但會(huì )對健康造成嚴重威脅。

目前，檢測藥品和保健品中糖皮質(zhì)激素的方法主要有TLC 法、HPLC 法、LC-MS /MS 法、UPLC-MS /MS 法或幾種方法的聯(lián)用，檢測的添加劑種類(lèi)都在20 種左右。

過(guò)程控制

隨著(zhù)中藥在國際上的廣泛應用，其有效性、安全性和制藥工藝過(guò)程質(zhì)量穩定性等問(wèn)題引起了專(zhuān)家學(xué)者的廣泛關(guān)注。中藥質(zhì)量控制一直是中藥研究與生產(chǎn)的難點(diǎn)和熱點(diǎn)，也是實(shí)現中藥現代化的重要基礎和關(guān)鍵。中藥指紋圖譜是指中藥經(jīng)適當處理后，采用現代科學(xué)分析手段，得到的能夠標示該中藥化學(xué)特性的共有圖形( 圖像) 的圖譜。近年來(lái)，中藥指紋圖譜在中藥質(zhì)量控制方面得到了廣泛應用，成為一種能為國內外廣泛接受的中藥質(zhì)量評價(jià)模式，符合中藥多數以復方和多成分給藥的特點(diǎn)，能較好地評價(jià)中藥及其制藥過(guò)程的真實(shí)性、穩定性和一致性。

現有以單一的化學(xué)成分變化來(lái)控制中藥制藥的過(guò)程，難以體現中藥制藥過(guò)程中化學(xué)成分的整體變化，也很難保證中藥藥效物質(zhì)基礎的穩定傳遞。采用多指標成分含量測定和色譜指紋圖譜技術(shù)的控制模式，可對中藥制藥過(guò)程進(jìn)行精確的全程控制，有效保證中藥的有效性和穩定性，將成為中藥質(zhì)控的重要手段，具有良好的應用前景。

質(zhì)量控制

中藥質(zhì)量標準的不完善是阻礙中藥產(chǎn)業(yè)走向現代化與國際化的障礙。中藥質(zhì)量控制模式研究從最初依靠簡(jiǎn)單的外觀(guān)性狀觀(guān)察和顯微鑒別，到具有專(zhuān)屬性薄層定性鑒別和內在成分的定量檢測方向發(fā)展。

研究者早期將薄層色譜引入中藥鑒定，因其具有快速、簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛使用。高效液相色譜(HPLC)、氣相色譜(GC)、質(zhì)譜(MS)等方法及各種方法的聯(lián)用也被廣泛應用于中藥質(zhì)量標準的研究。指紋圖譜與有效成分定量測定的結合、指紋圖譜與藥效關(guān)系的研究也推動(dòng)了中藥質(zhì)量標準研究的發(fā)展。在定量指標方面，由測定單一成分向測定多種成分發(fā)展。目前，劉昌孝院士提出了質(zhì)量標志物的概念，為中藥質(zhì)量控制的研究提出了新要求。液相色譜法在中藥的質(zhì)量控制中已經(jīng)被廣泛使用，具有操作簡(jiǎn)單、快速、高效、高靈敏度的特點(diǎn)，并且對于揮發(fā)性低、熱穩定性差、相對分子質(zhì)量大的高分子化合物以及離子型化合物尤為適合。

研究進(jìn)展

在線(xiàn)二維液相色譜技術(shù)在中藥研究中的應用進(jìn)展

中藥化學(xué)成分是中藥藥效的物質(zhì)基礎，但往往一味中藥就囊括了從極性到非極性、從小分子到大分子的多種化合物，其組成極為復雜。因此，對中藥化學(xué)成分進(jìn)行全面、快速地表征一直是中藥分析研究的熱點(diǎn)與難點(diǎn)，也是研究和闡明中藥藥效物質(zhì)基礎的先決條件。在現代中藥研究中，色譜技術(shù)尤其是液相色譜(LC)作為常用的分離、分析手段扮演著(zhù)不可替代的角色。多維液相色譜的建立和運用也為中藥物質(zhì)基礎表征和活性成分篩選提供了新技術(shù)。

在線(xiàn)二維液相色譜因峰容量高、分離效率好而受到眾多研究者的青睞。近年來(lái)，在線(xiàn)二維液相色譜被廣泛地應用于多個(gè)研究領(lǐng)域中復雜樣品的分析。在線(xiàn)二維液相法在中藥中的應用顯著(zhù)地提高了中藥化學(xué)成分分析和識別的效率，為后續藥效物質(zhì)基礎、作用機制和質(zhì)量評價(jià)研究奠定了良好基礎。

超高效液相色譜法在中藥分析中的應用

近年來(lái)，隨著(zhù)超高效液相色譜 的興起，及其與指紋圖譜技術(shù)的迅速融合， 超高效液相色譜指紋圖譜技術(shù)在中藥質(zhì)量評價(jià)中顯示出*的優(yōu)勢。有研究對比了土茯苓藥材的UHPLC和HPLC指紋圖譜， 發(fā)現UHPLC在10 min 內完成的譜峰，HPLC需要75 min才能完成， 說(shuō)明UPLC的分析效率更高，可顯著(zhù)縮短分析時(shí)間，減少流動(dòng)相的消耗;UHPLC可檢測更微量的樣品，進(jìn)樣量為1∶20 時(shí)，色譜峰高基本一致， 說(shuō)明UHPLC的色譜分離效果更好、靈敏度更高;UHPLC的洗脫條件比HPLC的變化更簡(jiǎn)單，色譜峰的漂移時(shí)間較短，在指紋圖譜軟件中色譜峰易于匹配。相關(guān)質(zhì)控技術(shù)已成功應用于復方丹參滴丸，并被2010 年版《中國藥典》收載。