液相色譜儀是分析工作者常用的“一門(mén)技術(shù)”。本人工作15.5年，深感何時(shí)能將液相做到有“打游戲”感覺(jué)時(shí)，便是到了游刃有余、駕輕就熟的境界?，F今的液相軟件均已具備了強大的數據處理功能，如能庖丁解牛般使用，便可將此測定做到事半功倍、輕松自如。

一、 水相中的溶質(zhì)溶解方式

水相中需溶解的無(wú)機鹽和表面活性劑等固體溶質(zhì)，建議采用加熱法，不建議采用振搖、超聲等方式。因此種方式的溶解，溶質(zhì)可能處于“臨界膠團濃度”，其后一旦遇到某特殊情形（如遇有機溶劑、溫度劇降等），極易析出少量結晶；而一旦析出，便將損傷儀器和色譜柱，呈現泵頭處析出“鹽和白粉”的現象。

二、 流動(dòng)相的配制與使用

1. 恒度洗脫

一定是將水相與有機相混合后、抽濾（使用混合型過(guò)濾膜），用一個(gè)管路（如A管）泵入儀器，這是使用的原則。切勿因節約有機相、便于摸索色譜條件等原因而使用兩個(gè)管路（一個(gè)純水相、一個(gè)純有機相）泵入儀器，即便配制了脫氣機。因此種情形極易造成水相中鹽和表面活性劑的少量析出。

剩余流動(dòng)相*可繼續使用，密封后放置陰涼處；待下次試驗時(shí)與新配制的流動(dòng)相混合后抽濾即可。無(wú)需擔心發(fā)霉、無(wú)機鹽析出、揮發(fā)、比例不準等問(wèn)題，這些皆為疑神疑鬼的表現。實(shí)踐是檢驗真理的標準！實(shí)踐吧~

2. 梯度洗脫

流動(dòng)相配制最為科學(xué)的方式是：A相為高比例的水相-低比例的有機相、B相為低比例的水相-高比例的有機相（英國藥典幾乎均如此）；其次為：A相為高比例的水相-低比例的有機相、B相為純有機相；最不科學(xué)的為：A相為純水相、B相為純有機相，如既有質(zhì)量標準采用了此種方式，建議改為第二種或第一種方式，否則基線(xiàn)漂移嚴重，難以進(jìn)行穩定的雜質(zhì)檢測。

梯度洗脫結束后，建議經(jīng)5分鐘回到初始狀態(tài)，再平衡5分鐘后開(kāi)始下一針測定。這10分鐘的穩定極為關(guān)鍵。切勿短時(shí)間內回到初始狀態(tài)，會(huì )對儀器和色譜柱損傷較大。

三、 色譜柱的安裝

標準SOP應為：

取A管路放入流動(dòng)相瓶中→擰松泵頭→流速由0ml/min逐漸升至10ml/min，觀(guān)察尾液是否呈瀑布狀流出，持續10秒→擰緊泵頭→流動(dòng)相呈拋射狀從安裝色譜柱的一端噴出，觀(guān)測是否呈拋物線(xiàn)狀，持續5秒→流速逐步降至1.0ml/min →安裝色譜柱，待20秒后，流動(dòng)相從色譜柱另一端呈泉水狀涌出再安裝另一端→手握兩端螺絲帽，擰緊。

以上安裝順序遵循的是：

逐級排放氣泡和儀器內存留的洗液，使得安裝后氣泡極難混入。本人曾試驗梯度洗脫連續一周，第一針與最后一針主成分保留時(shí)間相差在6秒以?xún)取?/p>

四、 試驗后色譜柱的清洗

1.最為常用的C8柱、C18柱

1.1 流動(dòng)相僅為乙腈-水或甲醇-水時(shí)

繼續沖洗30分鐘，流速1.0ml/min，柱溫保持試驗時(shí)溫度，即可。

1.2 水相中有無(wú)機鹽、表面活性劑或三乙胺、高氯酸等物質(zhì)時(shí)

先采用純水（或含有2%甲醇），沖洗A管路（試驗采用哪個(gè)管路，就要從頭到尾沖洗該管路），時(shí)間30分鐘（如流動(dòng)相中有表面活性劑，適當增加時(shí)間），流速1.0ml/min，柱溫可較試驗溫度高出5~10℃；隨后更換成20%甲醇再沖洗30分鐘，流速1.0ml/min，柱溫箱加熱裝置關(guān)閉。結束后取下色譜柱放置陰涼處。

很多同仁其后采用高比例的甲醇沖洗，實(shí)屬畫(huà)蛇添足，導致殘余的有機相中水相遇到高比例的甲醇后析出少量鹽和表面活性劑，從而在泵頭上、色譜柱中析出，也導致了色譜柱壽命大為縮短。本人曾使用過(guò)一根約2000元的色譜柱，正著(zhù)用了四年、倒著(zhù)用了兩年（倒著(zhù)用測非有關(guān)物質(zhì)）。

2. 其他類(lèi)型色譜柱

查詢(xún)獲取如何科學(xué)合理地使用與清洗保存該類(lèi)型色譜柱的方法，切勿盲動(dòng)，否則導致色譜柱性能急劇下降。

五、 試驗順序

工作流程應如下進(jìn)行：

(1) 0~2小時(shí) 配制流動(dòng)相、對照品和供試品溶液等，切勿催促昨日試驗同事。

(2) 2~3小時(shí) 采用A管路注入流動(dòng)相（B、C、D管路一般不用，除非梯度洗脫才用到B管路），平衡1小時(shí)。如流動(dòng)相中有表面活性劑，建議前一晚小流速過(guò)夜，第二天上班后將流速增至1.0ml/min，平衡1小時(shí)后即可開(kāi)始做試驗。

(3) 3~5小時(shí) 測定空白溶劑，一定要做到基線(xiàn)不漂移后方可開(kāi)始測定。所謂“不漂移”，通常系指以1.0%自身對照溶液主成分峰高約20%高度來(lái)設定的視野范圍觀(guān)察所得，切不可設定得過(guò)小，使得雜質(zhì)峰顯得很突兀、基線(xiàn)抖動(dòng)得很厲害，弄得人很擔心。

(4) 5~8小時(shí) 配制完所有樣品，預試了對照溶液和供試品溶液，設定好自動(dòng)進(jìn)樣程序，程序最后一針設定為小流速過(guò)夜，紫外燈關(guān)閉。切勿設定為切換至B管路洗脫，此舉得不償失。

(5) 9~24小時(shí) 放心回家，讓儀器自動(dòng)進(jìn)樣，除非不穩定的樣品（配制一份測定一針）。充分利用下班后的16小時(shí)，做到從容不迫、鎮定自若。如單位還無(wú)自動(dòng)進(jìn)樣裝置，建議向領(lǐng)導申請購買(mǎi)，因一臺自動(dòng)媲美三臺手動(dòng)。

(6) 第二天0~0.5小時(shí) 檢查并計算昨晚試驗結果，如發(fā)現不良記錄，將流速增至1.0ml/min，平衡30分鐘后，測定重新配制的該份樣品即可（同時(shí)回校對照一針）。無(wú)需全部重新測定，不要過(guò)度謹小慎微。

(7) 第二天0.5~2.0小時(shí) 如上沖洗色譜柱，交給其后試驗同事。

六、 液相軟件的使用

現今幾大主流品牌的硬件性能已相差無(wú)幾，主要還是軟件的設計是否能使操作者得心應手、隨心所欲。

建議掌握各軟件的批處理、編輯樣品處理模板等功能，做到一勞永逸，讓軟件充分為工作所用。“磨刀不誤砍柴工”：本人曾用20分鐘完成500個(gè)溶出度樣品數據處理，做出溶出曲線(xiàn)圖。體會(huì )一下~

七、 其他

1.如需使用正相系統，一定要單獨采用一臺儀器（如二手的、較為破舊的、淘汰的等），切勿采用異丙醇轉換，此舉對儀器損傷極大。

2. 正相所使用的流動(dòng)相（如正己烷、環(huán)己烷等），無(wú)需抽濾，混勻超聲后即可使用，“大道至簡(jiǎn)”。

3. 柱溫箱必須配制。如欲經(jīng)濟，可購買(mǎi)國產(chǎn)柱溫箱