液相色譜是打開(kāi)未知物質(zhì)世界的大門(mén)?？蒲兄械暮芏鄦?wèn)題都能在色譜圖中很好地反映出來(lái)。有些問(wèn)題可以通過(guò)改變設備參數來(lái)解決，而有些問(wèn)題必須通過(guò)操作程序來(lái)修改。畢竟，選擇合適的色譜柱和流動(dòng)相是獲得良好色譜的關(guān)鍵。

　　在液相色譜分離過(guò)程中，我們經(jīng)常會(huì )遇到六個(gè)常見(jiàn)的問(wèn)題。每一個(gè)問(wèn)題都可以通過(guò)使用適當的方法來(lái)開(kāi)發(fā)策略和工具來(lái)避免。

　　一、峰尾

　　峰值拖尾

　　1.屏幕被擋住了

　　如果色譜柱兩端的濾網(wǎng)堵塞，樣品會(huì )在篩板中堵塞形成延遲，樣品在柱后流出時(shí)峰形會(huì )形成尾部?？梢酝ㄟ^(guò)反吹塔或更換篩板來(lái)解決。

　　2.折疊列

　　是指色譜柱因其他原因失去柱效，無(wú)法保留物質(zhì)，使物質(zhì)不停留在固定相上，隨流動(dòng)相流出，但仍有一點(diǎn)柱效，從而形成拖尾?？梢酝ㄟ^(guò)重新加載或替換列來(lái)解決。

　　3.污染

　　樣本不在同一條起跑線(xiàn)上，從后面跑到最后，露出尾巴。更換色譜柱或用有機溶劑梯度沖洗色譜柱1小時(shí)以上即可解決。

　　4.流動(dòng)相PH值選擇錯誤

　　如果某些樣品在一定的pH值下，分子型和離子型之間存在動(dòng)態(tài)平衡，那么離子型會(huì )逐漸向分子型呈現拖尾。調節pH值可以抑制分子解離，改善拖尾現象。對于堿性化合物，相對較低的pH值更有利于獲得對稱(chēng)的峰。

　　二、高峰前

　　高峰前

　　1.樣本過(guò)載

　　保留的樣品在正常峰前持續釋放，形成前峰，從而降低樣品含量。

　　2.溶劑選擇不當

　　當樣品溶劑的洗脫能力遠強于流動(dòng)相時(shí)，會(huì )出現峰鋒。例如，反相色譜中使用腈作為樣品溶劑時(shí)，流動(dòng)相的洗脫能力較弱。峰鋒會(huì )出現。這個(gè)問(wèn)題可以通過(guò)選擇流動(dòng)相或相似比例的流動(dòng)相作為樣品溶劑來(lái)解決。

　　3.立柱損壞

　　柱效損失，無(wú)物料滯留。只能通過(guò)更換色譜柱來(lái)解決。

　　4.一個(gè)小峰出現在大峰之前，也就是想象中的鋒峰。即小峰埋在大峰之前，可以通過(guò)調節流動(dòng)相的洗脫梯度來(lái)解決。

　　第三，基線(xiàn)漂移

　　基線(xiàn)漂移

　　1.柱溫波動(dòng)

　　即使很小的溫度變化也會(huì )引起基線(xiàn)波動(dòng)，這通常會(huì )影響差分探測器、電導探測器、低靈敏度紫外探測器或其他光電探測器?？梢酝ㄟ^(guò)使用柱溫箱和在檢測器前使用熱交換器來(lái)控制柱溫度和流動(dòng)相的溫度來(lái)解決。

　　2.不均勻流動(dòng)相

　　條件變化引起的基線(xiàn)漂移大于溫度引起的基線(xiàn)漂移?？梢杂肏PLC級溶劑解決，流動(dòng)相使用前要脫氣。

　　3.流動(dòng)池被污染或有氣體

　　用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流動(dòng)池。如有必要，使用1N硝酸(不要使用鹽酸)。4.流量比或流量變化不當

　　比例或流量。為避免此問(wèn)題，請定期檢查流動(dòng)相的成分和流速。

　　5.樣本中有強烈的保留意見(jiàn)

　　芋頭峰以逐漸增加的基線(xiàn)形式洗脫。這可以通過(guò)使用保護柱來(lái)解決。如有必要，在進(jìn)樣之間或分析過(guò)程中，定期用強溶劑清洗色譜柱。

　　第四，更寬的山峰

　　更寬的山峰

　　1.由于色譜柱污染或失效，塔板數減少：更換相同類(lèi)型的新色譜柱。如果新色譜柱提供對稱(chēng)的峰，用強溶劑清洗舊色譜柱。

　　2.色譜柱與檢測器之間的管道過(guò)長(cháng)或管道內徑過(guò)大：更換內徑較小的短管道。

　　3.檢測器對反應時(shí)間或池體積的過(guò)度響應可以通過(guò)縮短響應時(shí)間或使用更小的流動(dòng)池來(lái)解決。

　　五.基線(xiàn)噪音

　　基線(xiàn)噪聲

　　1.流動(dòng)相、檢測器或泵中有空氣(尖峰):確保對流動(dòng)相進(jìn)行脫氣，并沖洗系統以去除檢測器或泵中的空氣。

　　2.泄漏：檢查管接頭是否松動(dòng)，泵是否泄漏，是否有鹽析和異響。如有必要，更換泵密封件。

　　3.流動(dòng)相混合不充分：用手或使用低粘度溶劑充分混合。

　　4.溫度影響(柱溫過(guò)高或檢測器未加熱):使用柱溫箱降低溫差或增加換熱器。

　　5.同一線(xiàn)路上的其他電子設備(意外噪音):斷開(kāi)LC、檢測器和記錄儀，檢查干擾是否來(lái)自外部，并進(jìn)行校正。使用精密穩壓電源。

　　第六，決議不夠充分

　　分辨率不足

　　1.流動(dòng)相梯度洗脫設置不合理：優(yōu)化梯度洗脫程序。

　　2.流動(dòng)相污染或變質(zhì)(導致保留時(shí)間改變):重新配置流動(dòng)相。

　　3.保護柱或分析柱堵塞：取下保護柱進(jìn)行分析，必要時(shí)更換；如果分析柱堵塞，可以進(jìn)行反沖洗；如果問(wèn)題持續存在，色譜柱可能會(huì )被強烈殘留的污染物損壞。再生計劃；如果問(wèn)題仍然存在，可能是入口堵塞。嘗試更換入口處的濾網(wǎng)或更換色譜柱。