從電子躍遷的角度來(lái)講，熒光是指某些物質(zhì)吸收了與它本身特征頻率相同的光線(xiàn)以后，原子中的某些電子從基態(tài)中的zui低振動(dòng)能級躍遷到較高的某些振動(dòng)能級。電子在同類(lèi)分子或其他分子中撞擊，消耗了相當的能量，從而下降到電子激發(fā)態(tài)中的zui低振動(dòng)能級，能量的這種轉移形式稱(chēng)為NO輻射躍遷。由zui低振動(dòng)能級下降到基態(tài)中的某些不同能級，同時(shí)發(fā)出比原來(lái)吸收的頻率低、波長(cháng)長(cháng)的一種光，就是熒光。被化合物吸收的光稱(chēng)為激發(fā)光，產(chǎn)生的熒光稱(chēng)為發(fā)射光。熒光的波長(cháng)總要長(cháng)于分子吸收的紫外光波長(cháng)，通常在可見(jiàn)光范圍內。熒光的性質(zhì)與分子結構有密切關(guān)系，不同結構的分子被激發(fā)后，并不是都能發(fā)射熒光。

在光致發(fā)光中，發(fā)射出的輻射總依賴(lài)于所吸收的輻射量。由于一個(gè)受激發(fā)的分子回到基態(tài)時(shí)可能以NO輻射躍遷的形式產(chǎn)生能量損失，因而發(fā)射輻射的光子數通常都少于吸收輻射的光子數，它以量子效率Q來(lái)表示。

在固定的實(shí)驗條件下，量子效率是個(gè)常數，通常Q小于1。對可用熒光檢測的物質(zhì)來(lái)說(shuō)，Q值一般在0.1～0.9之間。熒光強度F與吸收光強度成正比.對于稀溶液，熒光強度與熒光物質(zhì)溶液濃度、摩爾吸光系數、吸收池厚度、入射光強度、熒光的量子效率及熒光的收集效率等成正相關(guān)。在其他因素保持不變的條件下，物質(zhì)的熒光強度與該物質(zhì)溶液濃度成正比,這是熒光檢測器的定量基礎。熒光檢測器屬于溶質(zhì)型檢測器，可直接用于定量分析。

熒光涉及光的吸收和發(fā)射兩個(gè)過(guò)程，因此任何熒光化合物，都有兩種特征的光譜：激發(fā)光譜(exitation spectrum)和發(fā)射光譜(emission spectrum)。

　　熒光屬于光致發(fā)光，需選擇合適的激發(fā)光波長(cháng)(Ex)以利于檢測。激發(fā)波長(cháng)可通過(guò)熒光化合物的激發(fā)光譜來(lái)確定。激發(fā)光譜的具體檢測辦法是通過(guò)掃描激發(fā)單色器，使不同波長(cháng)的入射光激發(fā)熒光化合物，產(chǎn)生的熒光通過(guò)固定波長(cháng)的發(fā)射單色器，由光檢測元件檢測。zui終得到熒光強度對激發(fā)波長(cháng)的關(guān)系曲線(xiàn)就是激發(fā)光譜。在激發(fā)光譜曲線(xiàn)的zui大波長(cháng)處，處于激發(fā)態(tài)的分子數目zui多，即所吸收的光能量也zui多，能產(chǎn)生zui強的熒光。當考慮靈敏度時(shí)，測定應選擇zui大激發(fā)波長(cháng)。
       一般所說(shuō)的熒光光譜，實(shí)際上僅指熒光發(fā)射光譜。它是在激發(fā)單色器波長(cháng)固定時(shí)，發(fā)射單色器進(jìn)行波長(cháng)掃描所得的熒光強度隨熒光波長(cháng)(即發(fā)射波長(cháng)，Em)變化的曲線(xiàn)。熒光光譜可供鑒別熒光物質(zhì)，并作為熒光測定時(shí)選擇合適的測定波長(cháng)的依據。

另外，由于熒光測量?jì)x器的特性，使光源的能量分布、單色器的透射率和檢測器的響應等性能會(huì )隨波長(cháng)而變，所以同一化合物在不同的儀器上會(huì )得到不同的光譜圖，且彼此間無(wú)類(lèi)比性，這種光譜稱(chēng)為表觀(guān)光譜。要使同一化合物在不同的儀器上能得到具有相同特性的熒光光譜，則需要對儀器的上述特性進(jìn)行校正。經(jīng)過(guò)校正的光譜稱(chēng)為真正的熒光光譜。

激發(fā)波長(cháng)和發(fā)射波長(cháng)是熒光檢測的必要參數。選擇合適的激發(fā)波長(cháng)和發(fā)射波長(cháng)，對檢測的靈敏度和選擇性都很重要，尤其是可以較大程度地提高檢測靈敏度。