食物中的維生素含量介于納克到毫克之間，因此美國食品藥品監督管理局（FDA）強制要求對例如嬰兒配方奶粉等基質(zhì)中的維生素含量進(jìn)行標記。維生素的化學(xué)多樣性使得我們難以對所有維生素同時(shí)進(jìn)行萃取和分析。為此，水溶性和脂溶性維生素的分析通常分開(kāi)進(jìn)行，這就延長(cháng)了分析時(shí)間?，F在，我們要介紹一種降低維生素分析時(shí)間和成本的方法。

在我們的研究中，先采用了一種高靈敏度、可靠且用時(shí)大約 15 分鐘的方法，該方法采用紫外檢測技術(shù)了同時(shí)測定 9 種脂溶性維生素。在分離和定量操作中，我們采用的是配置安捷倫 Poroshell EC-C18 色譜柱的安捷倫 1260 Infinity 液相色譜系統。

隨后將論證如何將這種耗時(shí)的方法有效地轉換為一種省時(shí)（3.5 分鐘）的采用安捷倫 1290 Infinity 液相色譜系統的超液相色譜（UHPLC）方法。當我們迫切需要超快速分析時(shí)，這種大幅縮短時(shí)間的方法其益處顯而易見(jiàn)。

圖 1.采用 15 cm 安捷倫 Poroshell 120 EC-C18 色譜柱對 9 種脂溶性維生素進(jìn)行 HPLC 分離。放大的內插圖顯示了三種不同形式的維生素 A 的分離 （放大 圖片）

安捷倫 1260 Infinity 液相色譜系統可提供準確的分析結果

我們采用安捷倫化學(xué)工作站 B.04.02 軟件控制的安捷倫 1260 Infinity 四元泵液相色譜系統進(jìn)行本次研究。圖 1 展示了安捷倫 Poroshell 120 EC-C18 色譜柱（150 mm×3.0 mm，2.7 µm 粒度）在 13 分鐘內對 9 種脂溶性維生素進(jìn)行了分離。

由于分子結構的多樣性，因此zui大吸光度會(huì )因維生素的不同而不同。我們使用安捷倫化學(xué)工作站軟件的峰純度分析功能來(lái)檢查各個(gè)峰的純度并對方法的特異性作出評價(jià)。為了驗證該方法，我們對精度、線(xiàn)性范圍、準確度、特異性、回收率和可靠性進(jìn)行了研究。有關(guān)液相色譜系統和成功驗證結果的詳細信息，請參閱安捷倫應用報告 5990-8668EN.

營(yíng)養成分的標記：分析證明了方法的適用性

為了說(shuō)明該方法能夠有效用于營(yíng)養成分的標記，我們對嬰兒配方奶粉和復合維生素片中的維生素 D 進(jìn)行定量分析，然后將所得結果與標示值進(jìn)行比較。我們利用校準曲線(xiàn)的方程進(jìn)行計算。采用回收率校正方法，計算得到的嬰兒配方奶粉和復合維生素片中維生素 D 的含量分別為 6.0 µg/100 g 和 12.0 µg/片，這些數值與標示值非常接近。結果表明該方法非常適用于定量食品樣品中的維生素。

圖 2. 快速分析：采用 UHPLC 方法在安捷倫 1290 Infinity 液相色譜系統上對 9 種脂溶性維生素進(jìn)行分離 （放大 圖片）

采用 UHPLC 方法進(jìn)行分析只需短短三分鐘

接著(zhù)，我們開(kāi)發(fā)了一種采用二極管陣列進(jìn)行檢測的 UHPLC 方法，能夠有效分離 9 種脂溶性維生素（見(jiàn)圖 2）。此方法采用了由安捷倫化學(xué)工作站 B.04.02 軟件控制的安捷倫 1290 Infinity 液相色譜系統。有關(guān)系統和結果的詳細信息，請參閱安捷倫應用摘要 5990-8668EN。與之前使用的 15 分鐘 HPLC 梯度方法相比，這種新的 UHPLC 方法可節約 66% 的分析時(shí)間和溶劑。

總的來(lái)說(shuō)，使用這種 UHPLC 方法可獲得*的色譜分離度。雖然視黃醇和視黃酸會(huì )發(fā)生共洗脫，但這對維生素的分析不會(huì )造成問(wèn)題，因為在給定的樣品基質(zhì)中，維生素 A 同時(shí)以醇（視黃醇）和酸（視黃酸）的形式存在的幾率很低。

峰面積和保留時(shí)間重現性的相對標準偏差值較低，這證實(shí)了所開(kāi)發(fā)的 UHPLC 方法的可靠性和靈敏度。使用此方法能夠對食品樣品進(jìn)行營(yíng)養成分標記快速分析。